XXXVI Congreso SETH

XXXVI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 130 CO-237 Regulación del metabolismo de neutrófilos por miR-146a: consecuencias en inmunotrombosis Águila S 1 , García-Cañaveras JC 2 , Fernández-Pérez MP 1 , Zapata- Martínez L 1 , García-Barberá N 1 , De los Reyes-García AM 1 , Reguión-Gallego L 1 , Vicente V 1 , Lahoz A 2 , González-Conejero R 1 , Martínez C 1 1 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. IMIB (Murcia). 2 Unidad de Biomarcadores y Medicina de Precisión (UBYMP). Instituto de Investigación Sanitaria La Fe. Valencia Introducción: Los neutrófilos constituyen la primera línea de defensa del organismo frente a la invasión de patógenos. Además, su respuesta ante distintos estímulos inflamatorios dando lugar a trampas extracelulares de neutrófilos (NET) los implica en inmunotrombosis. Nuestro grupo ha demostrado en un modelo murino que la deficiencia de miR-146a, un regulador negativo de inflamación regula la trombosis, aunque el mecanis- mo molecular subyacente es desconocido. Dado que la NETosis supone para la célula un elevado gasto energético y metabólico, nuestra hipótesis es que la deficiencia de miR-146a condiciona alteraciones del metabolismo celular que favorecen la forma- ción de NET. Objetivo: Explorar en neutrófilos deficientes en miR-146a el metabolismo y la producción de ROS, fenómenos cruciales para la formación de NET. Material y métodos: Purificamos neutrófilos de médula ósea de ratones WT y miR-146a -/- . Se analizó la explosión respiratoria (OCR) por Seahorse XFe96 Analyzer (Agilent) y la producción de ROS celulares y ROS mitocondriales por citometría de flu- jo. Cuantificamos expresión de NADPH oxidasa ( Nox2 ) y otras enzimas metabólicas por RT-qPCR. Analizamos la glicólisis glo- bal (tasa de acidificación extracelular, ECAR) mediante Seahor- se Analyzer. Realizamos un estudio metabolómico profundo no dirigido con espectrómetro de masas de alta resolución (qua- drupole-orbitrap mass spectrometer, Q Exactive) junto con cro- matografía de ultra alta resolución (Vanquish). Por último, se hizo un modelo de trombosis arterial con FeCl 3 analizando el conteni- do de histona 3 citrulinada (H3cit, Abcam) en el trombo mediante microscopía de fluorescencia. Resultados: Tras la estimulación con PMA los neutrófilos deficientes en miR-146a presentaron una mayor explosión res- piratoria medida como la tasa consumo de oxígeno (OCR), com- parados con neutrófilos WT. Además estos neutrófilos mostraron una mayor generación de ROS, aunque esta producción diferen- cial no procedía de la mitocondria, si no de la NADPH oxidasa. Sin embargo, no se detectaron diferencias en la expresión de Nox2 (NADPH oxidasa). Mediante el uso del Seahorse se observó que neutrófilos de ratones miR-146a -/- presentaron una mayor glicóli- sis que neutrófilos WT, mediada indirectamente como la tasa de acidificación extracelular (ECAR). En el estudio metabolómico se observó un incremento del piruvato y el lactato (productos de la glicólisis) en neutrófilos miR-146a -/- . Además los niveles de los intermediarios de la ruta de las pentosas fosfato (PPP), como el NADPH, fueron más altos en neutrófilos miR-146a -/- . Por lo tan- to, la alta producción de ROS por parte de la NADPH oxidasa fue sustentada por la elevada generación de NADPH en la PPP. Sin embargo, no se observaron diferencias en la expresión en una de las principales enzima de esta ruta, la glucosa 6-P deshidrogena- sa. Por último, en el modelo de trombosis arterial in vivo se ob- servó mayor cantidad de citH3 (marcador de NET) en los trombos de ratones miR-146a -/- frente a WT. Conclusiones. La deficiencia de miR-146a en neutrófilos provoca una reprogramación metabólica, aumentando el flujo glicolítico y la activación de la PPP promoviendo así una mayor generación de ROS, procesos todos ellos clave para la forma- ción de NET. En consonancia, los trombos arteriales inducidos mostraron una mayor NETosis en los ratones deficientes en este miRNA. Por tanto, estos cambios metabólicos fundamentales en el neutrófilo podrían ser clave en la inmunotrombosis mediada por miR-146a. CO-238 Caplacizumab induce respuestas rápidas y prolongadas de la cifra de plaquetas, mejoría en el tiempo hasta alcanzar remisión completa y mayor supervivencia libre de recaída en pacientes con PTTA Coppo P 1 , Scully M 2 , De la Rubia J 3 , Peyvandi F 4 , Cataland S 5 , Kremer Hovinga JA 6 , Knoebl P 7 , Pavenski K 8 , Minkue Mi EJ 9 , Callewaert F 10 , De Passos Sousa R 11 1 Saint-Antoine University Hospital. AP-HP. París, Francia. 2 Cardiometabolic Programme. NIHR UCLH/UCL BRC. Department of Haematology. University College. London Hospital. Londres, Inglaterra. 3 Hospital Universitario Doctor Peset. Valencia, España. 4 Angelo Bianchi Bonomi Hemophilia and Thrombosis Center. Fondazione IRCCS. Milán, Italia. 5 Granda Ospedale Maggiore Policlinico. Milán, Italia. 6 Department of Pathophysiology and Transplantation. Università degli Studi di Milano. Milán, Italia. 7 Division of Hematology. Department of Internal Medicine. The Ohio State University. Columbus, Estados Unidos. 8 Department of Hematology and Central Hematology Laboratory. Inselspital. Bern University Hospital. University of Bern. Berna, Suiza. 9 Division of Hematology and Hemostasis. Department of Medicine 1. Medical University of Vienna. Viena, Austria. 10 Departments of Medicine and Laboratory Medicine. St. Michael’s Hospital. Toronto, Canadá. 11 University of Toronto. Toronto, Canadá Introducción: La púrpura trombótica trombocitopénica ad- quirida (PTTa) se caracteriza por trombocitopenia, anemia he- molítica y trombosis microvasculares. Un importante número de pacientes con PTTa sufre exacerbaciones a pesar del tratamiento con recambios plasmáticos (RP) diarios e inmunosupresión. El ensayo fase 3 HERCULES (NCT02553317) en pacientes con PTTa demostró que la asociación de caplacizumab al trata- miento convencional se asoció a una reducción significativa en el tiempo hasta la normalización de la cifra de plaquetas en compa- ración con placebo. Se observó, asimismo, que aunque algunos de los pacientes del grupo placebo normalizaban rápidamente la cifra de plaquetas muchos de ellos presentaban exacerbaciones también rápidas de la enfermedad. Objetivos: Caracterizar la duración de la respuesta plaquetar en el ensayo clínico HERCULES.