XXXVI Congreso SETH

Comunicaciones Orales 53 Trombosis CO-177 Caracterización de la variante de antitrombina p.thr147Ala, la primera mutación fundadora de origen africano causante de una deficiencia moderada de antitrombina de difícil diagnóstico funcional De la Morena-Barrio B 1 , Schelpe A 2 , Padilla J 3 , Garrido P 3 , Pareyn I 2 , Bravo C 3 , Vanhoorelbeke K 2 , Vicente V 3 , Jochmans K 4 , Corral J 3 , Orlando C 4 , De la Morena-Barrio ME 1 1 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB- Arrixaca. CIBERER. Murcia, España. 2 Laboratory for Thrombosis Research. IRF Life Sciences. KU Leuven Campus Kulak Kortrijk. Kortrijk, Bélgica. 3 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. Murcia, España. 4 Vrije Universiteit Brussel (VUB). Universitair Ziekenhuis Brussel (UZ Brussel). Department of Haematology. Bruselas, Bélgica Introducción: Las trombofilias hereditarias incluyen varian- tes genéticas raras con gran impacto trombótico y otras comunes, con menor riesgo trombótico que pudieron expandirse por proce- sos de selección positiva de potenciales efectos beneficiosos. La mayoría de los defectos trombofílicos congénitos se han estudia- do en población caucásica. La deficiencia congénita de antitrombina, es la trombofilia he- reditaria más grave, aunque existe una gran variabilidad clínica. De hecho, se han descrito dos mutaciones fundadoras, relativamente frecuentes en población caucásica, p.Leu131Phe y p.Pro73Leu, ambas causantes de deficiencia tipo II HBS, y asociadas con me- nor riesgo trombótico que otras deficiencias de antitrombina. Objetivo: El objetivo de este estudio fue caracterizar una nueva variante de antitrombina identificada de forma recurrente en pacientes de origen africano. Métodos: El estudio incluyó 12 pacientes no relacionados procedentes de diferentes países africanos, seleccionados de una cohorte de 421 pacientes con deficiencia de antitrombina, recluta- dos durante 30 años en Bélgica, por ser portadores de la variante p.Thr147Ala de SERPINC1 en heterocigosis. La antitrombina se caracterizó por métodos funcionales, bioquímicos, moleculares y por un modelo recombinante en células HEK-293T. El haplotipo asociado con la mutación se determinó con un novedoso método de secuenciación con nanoporos (MinION) a partir de dos ampli- cones grandes (> 6 Kb) generados por LR-PCR que cubren todo el gen SERPINC1, y posterior análisis bioinformático mediante un nuevo script creado para identificar haplotipos y confirmado manualmente mediante los softwares Variant Studio e IGV y por un algoritmo bioinformático que emplea el comando grep de Linux en las lecturas portadoras de la variante molecular. Resultados: Diez pacientes desarrollaron eventos trombóticos o complicaciones obstétricas. Los niveles antigénicos y la activi- dad anti-FIIa fueron normales o ligeramente reducidos, mientras que la actividad anti-FXa solo se detectó reducida con un método cromogénico comercial. La reducción del tiempo de incubación o el tratamiento con calor (40 °C) facilitaba la detección del efec- to funcional de la mutación. La inmunoelectroforesis cruzada en presencia de heparina mostró incremento de formas con baja afi- nidad por heparina solo cuando se emplearon condiciones de alta fuerza iónica. La proteína recombinante presentó menor actividad funcional. El modelado estructural sugería que la mutación podría eliminar tres puentes de hidrógeno, uno de ellos afectando Arg49, un residuo que interacciona directamente con la heparina (Fig. 1). Finalmente, el estudio por secuenciación con nanoporos de LR- PCR del alelo que contiene la variante p.Thr147Ala confirmó que todos los portadores compartían un mismo haplotipo con 13 SNP intragénicos (Fig. 2). Conclusiones: La variante p.Thr147Ala de SERPINC1 es responsable de una deficiencia de antitrombina tipo II HBS de muy difícil diagnóstico funcional. Esta variante, con muy baja prevalencia en Caucásicos, es relativamente común en población africana (MAF 1 % de acuerdo con datos de gnomAD, ExAC Figura 1. Modelado estructural de las consecuencias de la variante p.Thr147Ala en antitrombina. A B