XXXVI Congreso SETH

XXXVI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 134 Métodos: La propositus es una niña de 13a, de raza asiática y adoptada, con sangrado crónico moderado (BAT-ISTH = 6). Su re- cuento y tamaño plaquetario era normal (206 × 10 9 /L; 11.4 fL). El fenotipado plaquetario incluyó: PFA-100, agregación plaquetaria (LTA), activación por citometría de flujo, síntesis de TxA2 (ELI- SA); síntesis de eicosanoides por cromatografía de gas en tándem con espectrometría de masas [LC-MS], inmunofluorescencia, y western blot (WB) en lisados plaquetarios. El estudio genético se hizo mediante HTS-panel de genes. También analizamos las proteínas recombinantes silvestre (WT) y mutadas (generadas por mutagénesis dirigida) expresadas en células 293T-HEK. El análi- sis de N-glicosilación incluyó el tratamiento con PNGase-F. Resultados: La paciente mostró: PFA-100 patológico (> 300 s) para COL-EPI; LTA ausente con colágeno (10 µg/mL) y AA (1,6mM), reducida con ADP (10 µM) y normal con U46619 (5mM) (análogo de TXA 2 ), sugiriendo una síntesis alterada de TXA 2 ; una concentración de TxA 2 en sobrenadantes de LTA < 10 % frente a controles; un perfil de prostanoides alterado en sangre total estimulada con colágeno/TRAP. El estudio HTS identificó la nueva variante heterocigota c.428A>G (p.Asn143Ser), en el dominio catalítico de COX-1, también implicado en la dimeriza- ción de COX-1, que elimina una secuencia de N-glicosilación. El estudio de WB no detectó cambios cuantitativos en COX-1, pero identificó una variante de menor tamaño. Células transfectadas con la variante COX-1 Ser143 generaban una COX-1 de menor tamaño y no sintetizaban TXA 2 en respuesta a AA (WT: 2906; Ser143: 194 pg/mL) (Figs. 1 A y B). La transfección de la muta- ción p.Ser145Ala, que afecta otro residuo del mismo sequon de N-glicosilación, generó también una proteína mutante de menor tamaño y las células presentaban un defecto similar de síntesis de TXA 2 (189 pg/mL). Células cotransfectadas (HET) con COX-1 WT y Ser143 expresaban dos formas de COX-1 que se unificaban tras tratamiento con PNGase-F, confirmando el defecto de N-gli- cosilación asociado con la mutación, y presentaban una reducción del 70 % en la generación de TxA 2 (904 pg/mL), sugiriendo un efecto dominante negativo (Figs. 1 A y B). Este efecto dominante negativo se validó en una curva dosis-respuesta de AA a dosis ba- jas (con 1 µMAA [WT: 35; Ser143: 1; co-transfectadas: 5 pg/mL) sugiriendo un mayor secuestro del AA por la mutante (Fig. 1C). Conclusión: Identificamos una nueva variante en COX-1 en una paciente con sangrado y disfunción plaquetaria rele- vante, p.Asn143Ser, que provoca la pérdida de un glicano en el dominio catalítico de la enzima. Esta, o cualquier otra, forma hipoglicosilada en esta posición provoca que la enzima pierda su actividad catalítica. Además, esta mutación tiene un efecto dominante negativo sobre la funcionalidad del alelo silvestre, justificando el carácter dominante del trastorno plaquetario de la paciente. Este caso refleja, por primera vez, la criticidad del N-Glycano 143 en la COX-1 humana, y demuestra, en una nueva proteína, el defecto de glicosilación como mecanismo de enfer- medad. ISCIII-FederPI17/01311&PI17/01966, FMMAP172142019, SETH-FETH Premio López Borrasca 2019, F.Séneca 19873/ GERM/15, GT-Patología Hemorrágica-SETH. Conceptos básicos en hemostasia CO-242 Detección y caracterización mediante secuenciación por nanoporos de la primera inserción de un retrotransposón en SERPINC1 causante de deficiencia de antitrombina con efecto fundador De laMorena-Barrio B 1 , de laMorena-BarrioME 1 , Sanchís-Juan A 2 , López-Fenández MF 3 , Arija Tejero O 4 , Rodríguez Alen A 5 , Padilla J 1 , Miñano A 1 , Borràs Agusti N 6 , Cuenca J 7 , Bravo-Pérez C 1 , Cifuentes R 8 , Vidal F 6 , OuwehandW 2 , Vicente V 1 , Corral J 1 1 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. Murcia, España. 2 Department of Haematology. University of Cambridge. NIHR BioResource. Cambridge University Hospitals NHS Foundation Trust. Cambridge Biomedical Campus. NHS Blood and Transplant Centre. Cambridge, Inglaterra. 3 Complexo Hospitalario Universitario de A Coruña. A Coruña, España. 4 Hospital Universitario Lucus Augusti. Lugo, España. 5 Hospital Virgen de la Salud. Toledo, España. 6 Banc de Sang i Teixits. Vall d’Hebron Research Institute. Universitat Autònoma de Barcelona (VHIR-UAB). Barcelona, España. 7 Departamento de Informática y Sistemas. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. Murcia, España. 8 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. CIBERER. Murcia, España Introducción: Los retrotransposones son secuencias repeti- tivas de ADN que constituyen el 42 % del genoma humano, con capacidad de transcribirse y reinsertarse. Los LINE, son los retro- transposones más abundantes, seguidos de SINE y SVA. Los SVA (SINE-VNTR-Alu) (0,2 % del genoma), descritos recientemente, se han asociado con cáncer, síndrome de Lynch, o distrofia mus- cular. La dificultad en la detección de estas variantes estructurales mediante métodos moleculares rutinarios (Sanger, NGS, MLPA, aCGH, SNP array) sugiere que su implicación en enfermedades esté subestimada. Como hasta un 20 % de las deficiencias de antitrombina, la trombofilia congénita más grave, carecen de caracterización molecular, nuestro objetivo fue buscar inserciones de retrotrans- Figura 1.