XXXVI Congreso SETH

XXXVI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Trombosis y Hemostasia 68 Consultancy/speaker fees: Boehringer Ingelheim, Bayer, Daiichi Sankyo. Bibliografía 1. Agnelli G, et al. Apixaban for Extended Treatment of Venous Throm- boembolism. N Eng J Med 2013;368:8. 2. Wetz JL, et al. Rivaroxaban or Aspirin for Extended Treatment of Venous Thromboembolism. N Eng J Med 2017. Coagulopatías congénitas CO-191 Aplicación de la secuenciación de última generación en la detección de alteraciones moleculares tipo copy number variations en trastornos plaquetarios congénitos Santos-Mínguez S 1 , Miguel-García C 1 , Montaño A 1 , Ramírez V 1 , Rodríguez-Iglesias A 1 , Marín-Quilez A 1 , González-Porras JR 2 , González-García H 3 , Huerta-Aragonés J 4 , Blázquez-Goñi C 5 , Rodríguez-Alén A 6 , García-Díaz C 7 , Urbaneja-Rodríguez E 8 , Hortal Benito-Sendín A 9 , Revilla N 10 , Palma-Barqueros V 10 , Rivera J 11 , Hernández-Rivas JM 12 , Bastida JM 13 , Benito R 14 1 IBSAL. IBMCC. Universidad de Salamanca. CSIC. Centro de Investigación del Cáncer (CIC). Salamanca. 2 IBSAL. IBMCC. Universidad de Salamanca. CSIC. Centro de Investigación del Cáncer (CIC). Departamento de Hematología. Hospital Universitario de Salamanca. Salamanca. 3 Servicio de Pediatría. Hospital Clínico Universitario de Valladolid. Valladolid. 4 Servicio de Oncología y Hematología Pediátricas. Hospital Materno Infantil Gregorio Marañón. Madrid. 5 Servicio de Hematología. Hospital de Jerez. Jerez de la Frontera, Cádiz. 6 Servicio de Hematología y Hemoterapia. Hospital Virgen de la Salud. Toledo. 7 Servicio de Hematología. Complejo Asistencial de Burgos. Burgos. 8 Servicio de Pediatría. Hospital Clínico Universitario de Valladolid. Valladolid. 9 Servicio de Pediatría. Complejo Asistencial de Zamora. Zamora. 10 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. CB15/00055-CIBERER. Murcia. 11 Servicio de Hematología y Oncología Médica. Hospital Universitario Morales Meseguer. Centro Regional de Hemodonación. Universidad de Murcia. IMIB-Arrixaca. CB15/00055-CIBERER. En representación del proyecto Caracterización Funcional y Molecular de Trastornos Plaquetarios Congénitos, Grupo de Trabajo de Patología Hemorrágica de la SETH. Murcia. 12 IBSAL. IBMCC. Universidad de Salamanca. CSIC. Centro de Investigación del Cáncer (CIC). Departamento de Hematología. Hospital Universitario de Salamanca. Salamanca. 13 IBSAL. IBMCC. Universidad de Salamanca. CSIC. Centro de Investigación del Cáncer (CIC). Departamento de Hematología. Hospital Universitario de Salamanca. En representación del proyecto Caracterización Funcional y Molecular de Trastornos Plaquetarios Congénitos, Grupo de Trabajo de Patología Hemorrágica de la SETH. Salamanca. 14 IBSAL. IBMCC. Universidad de Salamanca. CSIC. Centro de Investigación del Cáncer (CIC). Salamanca Introducción: Los trastornos plaquetarios congénitos (TPC) son un grupo amplio de enfermedades raras, cuyo diag- nóstico funcional y molecular ha sido tradicionalmente comple- jo. Con la aparición de las técnicas de secuenciación de alto rendimiento (HTS), se ha incrementado el porcentaje de los pa- cientes que alcanzan un diagnóstico genético. Sin embargo, en un alto número de pacientes la patología molecular subyacente sigue siendo desconocida. Las variaciones de número de copias (en adelante, CNV, Copy Number Variations ) se definen como deleciones o amplificacio- nes de segmentos del genoma con un tamaño mínimo de entre 50bp y 1kb. Forman parte del grupo de mutaciones denominado variaciones estructurales (SV). Convencionalmente se utilizan cariotipo y FISH para analizar cambios numéricos/estructurales y CGH array (CGHa) o MLPA para CNV y grandes pérdidas/ ganancias. Sin embargo, la HTS se está implementando en la de- tección de un amplio espectro de nuevas alteraciones. Objetivo: Analizar la presencia de alteraciones estructurales CNVs utilizando un panel personalizado de HTS en pacientes con TPC. Métodos: Se diseñó un panel personalizado mediante el sof- tware SureDesign para el análisis de las regiones codificantes de genes con relevancia en TPC, y que además permitiera detectar CNV. El tamaño del panel fue de 499,979 kbp y se emplearon 57070 sondas para la captura de las regiones diana. Analizamos el DNA de 75 pacientes con sospecha de TPC. Se llevó a cabo la secuenciación masiva con SureSelectQXT-Target-Enrichment (Agilent) en un NextSeq (Illumina). El análisis de los datos se realizó con un pipeline propio. Para la detección de CNVs y aneuploidías se usó el método de “Profundidad de lectura”, Dep- th-Of-Coverage (DOC), que asume una correlación lineal entre la profundidad de lectura y el número de copias. Una profundidad menor de la esperada representa una pérdida o deleción, y una profundidad mayor representa una ganancia o amplificación. Resultados: El fenotipo clínico y biológico de los pacientes incluidos se resume en la tabla I. Para el análisis de CNVs se ob- tuvo una media de 1,8 × 10 6 lecturas/muestra con unas coberturas medias mínimas de 300X que permitió detectar las pérdidas en genes como GP1BB, TBX1, RUNX1, VWF y RBM8A . En concreto, se identificaron las deleciones del22q que inclu- ye los genes GP1BB y TBX1 en los pacientes 1 y 2, con sospecha de Di George, posteriormente validados por MLPA y CGHa, res- pectivamente. En el paciente 3 se identificó una del21q que con- tiene el gen RUNX1 (cuyo cariotipo mostraba una monosomía del cromosoma 21). En el paciente 4, diagnosticado con Síndrome TAR (trombocitopenia y ausencia de radio) se identificó un SNP de baja frecuencia que afecta a la región 5´UTR del gen RBM8A (c.-21 G>A;rs139428292) y una del1q cuya validación por CGHa mostraba la microdeleción del 1q21.1. En el paciente 5 se iden- tificó la pérdida homocigota de 3 exones (14-16) del gen VWF , compatible con su enfermedad de von Willebrand tipo 3 (Fig. 1). Conclusiones: El uso de este panel personalizado de HTS nos ha permitido detectar tanto mutaciones germinales puntuales o de pequeño tamaño como CNV. El análisis de CNV es particu- larmente necesario y útil en el diagnóstico genético de pacientes con TPC sindrómicos y con alta sospecha, en los que no se detec- tan mutaciones convencionales. ISCIII-Feder PI17/01311 & PI17/01966, GRS 2061A/19, GRS 1647/A/17, IBSAL IBY17/00006, FMM AP172142019, SETH-FE- TH Premio López Borrasca 2019, Beca predoctoral JCYL, AECC, F.Séneca 19873/GERM/15, GT-Patología Hemorrágica-SETH. No existe ningún conflicto de interés.